产品信息

中文名称：顺乌头酸酶（ACO）活性检测试剂盒说明书

储存条件：按照标签要求储存

有效期：6个月

检测意义：顺乌头酸酶（aconitase），三羧酸循环中的酶，催化柠檬酸转变为异柠檬酸。柠檬酸本身不易氧化，在顺乌头酸酶作用下，通过脱水与加水反应，使羟基由β碳原子转移到α碳原子上，生成易于脱氢氧化的异柠檬酸，为进一步的氧化脱羧反应作准备。

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检测原理

ACO催化柠檬酸转化成异柠檬酸，异柠檬酸氧化脱羧将NAD+ 还原生成NADH，导致340nm处光吸收上升。

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计算方法

1. 组织、细胞样本顺乌头酸酶（ACO）计算
(1) 按样本鲜重计算：
单位定义： 每克组织每分钟生成1nmol NADH为一个酶活力单位。
ACO（U/min/g 鲜重）=[△A×V 反总÷（ε×d）×109]÷（V 样÷V 样总×W）÷T=△A×0.268×103÷W
(2) 按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克蛋白每分钟生成1nmol NADH为一个酶活力单位。
ACO（U/min/mg prot）=[△A×V 反总÷（ε×d）×109]÷（V 样×Cpr）÷T=△A×0.268×103÷Cpr
(3) 按细菌或细胞数量计算：
单位定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmol NADH为一个酶活力单位。
ACO（U/104 cell）= （U/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷(V样÷V样总×500) ÷T=△A×0.536
V反总：反应体系总体积，0.2×10-3 L；
ε：NADH，6.22×103L/mol/cm；
d：比色皿光径，0.6cm；
V样：加入样本体积，0.04mL；
V样总：加入提取液体积，1mL；
T：反应时间，5min；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
109：单位换算系数，1mol=109nmol；
W：样本质量，g；
500：细菌或细胞总数，500 万。

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注意事项

1. 实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测；

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