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中文名称:BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书
储存条件:按照标签要求储存
有效期:6个月
检测意义:BCA蛋白浓度测定试剂盒
碱性条件下,蛋白将 Cu2+还原为 Cu+,Cu+与 BCA 试剂形成紫蓝色的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂SDS,TritonX-100,Tween 不影响检测结果,但受螯合剂(EDTA,EGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。
以吸光度为横坐标,以蛋白浓度为纵坐标,绘制标准曲线,并求出标准线性方程
y=kx+b,y:mg/mL。将样本吸光度值带入公式计算出样本中的蛋白浓度。若样本进行稀释,乘以相应的稀释倍数即可。
1. 不同样本中蛋白含量差异较大,需先做预实验确认样本浓度。
2. 标准品可以分装保存,尽量避免反复冻融。
3. 该反应颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应的速度和温度有关。每次蛋白定量都需要重新做新的标准曲线,因为显色反应的颜色与温度和时间有关。
4. BCA工作液需新鲜配制后立即使用。
5. BCA试剂如果发现有细菌污染,则不能再使用。
6. BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中SDS 3%,Triton X-100 5%,Tween20、60、80.5%。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM ,无EGTA,二硫苏糖醇(DTT) 低于0.5mM,β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.05%