产品信息

中文名称：过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒说明书

储存条件：按照标签要求储存

有效期：6个月

检测意义：几乎所有的生物机体都存在过氧化氢酶。其普遍存在于能呼吸的生物体内，主要存在于植物的叶绿体、线粒体、内质网、动物的肝和红细胞中，在细胞中促进过氧化氢分解,使其不会进一步产生毒性很大的氢氧自由基,从而保护抗氧化酵素系统的功能作用,对于人体的生长发育和代谢活动亦具有重要意义。

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检测原理

过氧化氢酶（Catalase）能够分解H2O2 ，通过加入过量的钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵反应生成淡黄色的络合物，在405nm处测定其变化量，可计算出CAT的活力。

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计算方法

1. 标准曲线的制备：以吸光度值为横坐标，过氧化氢浓度为纵坐标，绘制标准曲线。过氧化氢的标准曲线x为吸光度值，y为过氧化氢浓度（μmol/mL）；将ΔA带入标准曲线计算出样本中过氧化氢浓度y（μmol/mL）。
2. 血清样本CAT计算
单位定义：每毫升血清每分钟分解1μmol的H2O2的量为一个活力单位。
计算公式：CAT（U/mL）＝ y × V反总 ÷ V样 ÷ T ＝2.2 × y
3. 组织、细胞样本CAT计算
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟分解1μmol的H2O2的量为一个活力单位。
计算公式：
CAT（U/mg prot）＝y × V反总÷ ( V样 × Cpr) ÷ T ＝2.2 × y ÷ Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟分解1μmol的H2O2的量为一个活力单位。
计算公式：
CAT（U/g）＝y × V反总 ÷ ( W × V样 ÷ V样总 ) ÷ T ＝2.2 × y ÷ W
（3）按照细菌或细胞数量计算
单位定义：每1百万个细菌或细胞每分钟分解1μmol的H2O2的量为一个活力单位。
计算公式：
CAT（U/106 cell）＝y × V反总 ÷ ( 5 × V样 ÷ V样总) ÷ T＝0.44 × y
V反总：反应体系总体积，0.44mL；
V样：加入样本体积，0.02mL；
V样总：加入提取液体积，1 mL；
T：反应时间，10min；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
5：细胞/细菌数，500万；
W:样本重量，g

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注意事项

1. 样本测试前请选取2个预期差异最大的样本，稀释成不同浓度进行预试，以选取最佳取样浓度；
2. 若对照孔OD值减去测定孔OD值高于0.4时，可将样本用提取液进行稀释，计算时乘以相应的稀释倍数即可；若测定孔OD值减去对照孔OD值低于 0.01 时，可以增加样本取样量或者取样浓度。
3. 过氧化氢的标准曲线不同操作条件下，可能存在差异。可以自行按照附录I进行相关检测。

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