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中文名称:D-乳酸含量测定试剂盒说明书
储存条件:按照标签要求储存
有效期:6个月
检测意义:乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物,与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关, 乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。
D-乳酸在D-乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸,同时使NAD+还原生成NADH和H+,在PMS作用下,WST可以与NADH反应,产生水溶性formazan,在450nm处有特征吸收峰。
1. 标准曲线的绘制
以各标准溶液浓度为x轴,以其对应的吸光值(ΔA标准)为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将 ΔA测定带入公式中得到x(mmol/mL)。
2. D-乳酸含量计算
(1)按照蛋白含量计算
D-乳酸含量(mmol/mg prot)= x×V样本÷(V样本×Cpr)
(2)按照样本质量计算
D-乳酸含量(mmol/g 质量)=
(3)按照细胞数量计算
D-乳酸A含量(mmol/106 cell)=
(4)按照液体体积计算
D-乳酸含量(mmol/mL)=
V样本:加入的样本体积,0.02mL;
W:样本质量,g;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL,蛋白浓度需自行测定;
V提取液一:加入的提取液一体积,1mL;
N:细胞数量,以百万计;
V液体:液体样本体积,0.1mL。
1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2. 为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准), 确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定。