产品信息

中文名称：羟脯氨酸（HYP）含量测定试剂盒说明书

储存条件：按照标签要求储存

有效期：6个月

检测意义：HYP 是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

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检测原理

样本经酸水解产生游离的HYP，进一步被氯胺T氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物，在560nm处有特征吸收峰。通过测定样本水解液560nm 吸光值，可计算HYP含量。

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计算方法

1. 标准曲线的绘制
以标准品的浓度为x轴，∆A标准为y轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b。将∆A测定带入方程得到y（µg/mL）。
2. 乳酸含量计算
（1）按照蛋白含量计算
组织羟脯氨酸含量（µg/mg prot）= y×V样本÷（Cpr×V样本）×F
（2）按照样本质量计算
组织羟脯氨酸含量（µg/g质量）= y×V样本÷（W×V样本÷V组提）×F
（3）按照细胞数量计算
细胞羟脯氨酸含量（µg/106 cell）= y×V样本÷（N×V样本÷V胞提）×F
（4）按照液体体积计算
液体羟脯氨酸含量（µg/mL）= y×V液提÷V液体×F
V样本：加入的样本体积，0.12mL；
V组提：组织提取液体积，1mL；
V胞提：细胞提取液体积，1mL；
V液提：液体提取液体积，1mL；
V液体：前处理中液体加入体积，0.3mL；
W：样本质量，g；
N：细胞数量，以106 为单位，百万个；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。

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注意事项

1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2. 为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准）， 确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定。
3. 试剂有一定的毒性，请操作时做好防护措施，防止吸入或与皮肤接触。
4. 按样本蛋白浓度计算时，需单独提取样本中的蛋白质并测定。

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