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中文名称:辅酶Ⅰ NAD(H)含量检测试剂盒使用说明书
储存条件:按照标签要求储存
有效期:6个月
检测意义:NADH 与 NAD+是细胞中的一对氧化还原对,NADH 是辅酶Ⅰ NAD 的还原形式,NAD+ 是其氧化形式。在氧化还原反应中,NADH 作为氢和电子的供体,NAD+作为氢和电子的受体,参与呼吸作用、光合作用、酒精代谢等生理过程。它们作为生物体内很多氧化还原反应的辅酶参与生命活动,并相互转化。
分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NAD+和 NADH ,NADH 通过递氢体的递氢作用,与显色剂反应生成黄色水溶性甲瓒,在 450nm 下检测,得到 NADH 含量。利用乙醇脱氢酶特异性还原 NAD+为 NADH ,从而检测 NAD+含量。
(一)NAD+含量的计算
标准曲线y = 0.0372x+0.0068;R2 = 0.9993;其中y为△A,x为 NAD+浓度nmol/mL
1. 血清(浆)中 NAD+含量计算
NAD+含量(nmol/mL)=[(△A-0.0068)÷0.0372×V1) ]÷(V3×V1÷V2)
=537.6×(△A-0.0068)
2. 组织、细菌或细胞中 NAD+含量计算
(1) 按样本蛋白浓度计算
NAD+ (nmol/mg prot)=[(△A-0.0068)÷0.0372×V1)]÷(V1×Cpr)
= 26.88×(△A-0.0068)÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
NAD+ (nmol/g 鲜重)= [(△A-0.0068)÷0.0372×V1)]÷(W×V1÷V2)
= 53.76×(△A-0.0068)÷W
(二)NADH含量的计算
标准曲线 y =0.0363x + 0.0019;R2= 0.9985;其中y为△A,x为 NADH浓度 nmol/mL
1. 血清(浆)中 NADH含量计算
NADH 含量(nmol/mL)= [ (△A-0.0054)÷0.0363×V1) ]÷(V3×V1÷V2)
= 550.96×(△A- 0.0054)
2. 组织、细菌或细胞中 NADH含量计算
(3) 按样本蛋白浓度计算
NADH (nmol/mg prot)= [ (△A- 0.0054)÷0.0363×V1) ]÷(V1×Cpr)
= 27.55×(△A- 0.0054)÷Cpr
(4) 按样本鲜重计算
NADH (nmol/g 鲜重)=[(△A- 0.0054)÷0.0363×V1) ]÷(W×V1÷V2)
= 55. 1×(△A- 0.0054)÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.02mL;
V2:加入提取液体积,2mL;
V3:加入血清(浆) 体积:0. 1mL;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;
W:样本质量,g;
1. 建议正式实验前取 2 个样本做预测定,了解本批样本含量情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!