产品信息

中文名称：亮氨酸氨基肽酶（LAP）活性检测试剂盒说明书

储存条件：按照标签要求储存

有效期：6个月

检测意义：亮氨酸氨基肽酶（LAP）是一种膜结合蛋白分解酶，广泛分布于肝、胰、肾等组织中，能水解肽链N端并由亮氨酸与其他氨基酸形成肽键，参与组织蛋白和肽类的降解更新。亮氨酸氨基肽酶可作 为肝脏疾病初步检测的一项重要指标，特别是肝癌的鉴别诊断。

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检测原理

亮氨酸氨基肽酶可催化L-亮氨酸对硝基苯胺生成对硝基苯胺，产物在405 nm处具有特征吸收峰，通过吸光值变化即可表征亮氨酸氨基肽酶的活性。

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计算方法

1. 按样本质量计算：
单位定义：每g组织每分钟生成1 nmol对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP(U/g)= ∆A×V反总×V样总×109÷（ε×d×V样×W×T）=1125.75× ∆A÷W
2. 按组织蛋白浓度计算：
单位定义：每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP（U/mg prot）=∆A×V反总×109÷（ε×d×V样×Cpr×T）=1125.75× ∆A÷Cpr
3. 按细菌或细胞数量计算：
单位定义：每104个细菌或细胞每分钟生成1 nmol对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP（U/104 cell）=∆A×V反总×V样总×109÷（ε×d×V样×细菌或细胞数量×T）=1125.75× ∆A÷细菌或细胞数量
4. 按血清（浆）体积计算：
单位定义：每mL液体样本每分钟生成1 nmol的对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP（U/mL）=∆A×V反总×109÷（ε×d×V样×T）=1125.75× ∆A
V样：反应体系中加入上清液的体积，0.01 mL；V样总：上清液总体积，1 mL；V反总： 反应体系总体积，2×10-4 L；ε：对硝基苯胺摩尔消光系数，9.87×103 L/mol/cm；d：96孔板光径，0.6cm；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；细菌或细胞数量：以万计；T：反应时间，3 min；109：单位换算系数，1 mol=109 nmol。

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注意事项

1. 如果∆A大于0.5时或A测定大于1.5时，建议将粗酶液使用提取液适当稀释后再进行测定；如果∆A小于0.02，建议适当增加样本量或延长酶促反应时间（37℃反应时间可延长至10-30 min）后再进行测定，计算公式注意修改；
2. 准确在规定时间点完成吸光值测定，以确保实验结果的准确性和重复性；
3. 为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准）， 确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定。

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