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中文名称:脂肪酶活性检测试剂盒说明书
储存条件:按照标签要求储存
有效期:6个月
检测意义:脂肪酶(lipase)又称三酰甘油水解酶,是能水解长链脂肪酸三酰甘油的一类酶的总称。血清脂肪酶活性测定可用于胰腺疾病诊断,特别是在急性胰腺炎。急性胰腺炎和非急性胰腺炎患者与正常人血清脂肪酶水平差异较大,在急性胰腺炎的诊断上具有更好的敏感性和特异性。
脂肪酶水解底物产生对硝基苯酚(pNP),其在碱性条件下显黄色,在410nm下测定吸光值,可计算出脂肪酶活性。
1. 标准曲线绘制:
以吸光度值为横坐标,标准品浓度为纵坐标,绘制标准曲线,x为吸光度值,y为标准品浓度浓度(μg/mL)。根据标准曲线,将ΔA带入公式计算出样本浓度(y,μg/mL);
2. 血清样本脂肪酶计算
单位定义:每毫升血清每分钟催化产生1μg对硝基酚的量为一个活力单位。
计算公式:脂肪酶(U/mL)= y ÷ T
3. 组织、细胞脂肪酶计算
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义:每毫克组织蛋白每分钟催化产生1μg对硝基酚的量为一个活力单位
计算公式:脂肪酶(U/mg prot)=y ÷ Cpr ÷ T
(2) 按样本鲜重计算
单位定义:每克组织催化产生1μg对硝基酚的量为一个活力单位。
计算公式:脂肪酶(U/g)=y ÷ ( W ÷ V样总 ) ÷ T
(3)按照细菌或细胞数量计算
单位定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生1μg对硝基酚的量为一个活力单位。
计算公式:脂肪酶(U/104 cell)=y ÷ ( 500 ÷ V样总) ÷ T
V样:加入样本体积,0.02mL;
V样总:加入提取液体积,1 mL;
T:反应时间,15min;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;
500:细胞/细菌数,500万;
1. 比色时,溶液呈现淡黄色,在2h内保持稳定。
2. 不同样本的脂肪酶差异较大,实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。根据样本活性可以适当增加或者减少称取样本量,也可调整反应时间。计算时调整相应的系数即可。