产品信息

中文名称：NADP-苹果酸酶（NADP-ME）活性检测试剂盒说明书

储存条件：按照标签要求储存

有效期：6个月

检测意义：苹果酸酶（ME）广泛存在于动植物、微生物和培养细胞中，尤其在植物组织中活性较高，根据不同的辅酶特异性，苹果酸酶分为 NAD-依赖型和 NADP-依赖型。苹果酸酶能够催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应，产生丙酮酸和 CO2，以及伴随 NAD(P)+的还原反应，是苹果酸代谢过程的关键酶，其活性与生物合成和抗氧化密切相关。

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检测原理

NADP-苹果酸酶能够催化苹果酸和 NADP+生成丙酮酸和 NADPH，NADPH 在 340 nm 处具有特征吸收峰，通过吸光值变化速率即可表征 NADP-苹果酸酶的活性。

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计算方法

1. 组织、细胞样本NADP-苹果酸酶（NADP-ME）计算
(1) 按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织每分钟生成1nmol NADPH为一个酶活力单位。
NADP-ME（U/min/g 鲜重）=[△A×V 反总÷（ε×d）×109]÷（V 样÷V 样总×W）÷T=△A×0.268×103÷W
(2) 按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克蛋白每分钟生成1nmol NADPH为一个酶活力单位。
NADP-ME（U/min/mg prot）=[△A×V反总÷（ε×d）×109]÷（V 样×Cpr）÷T=△A×0.268×103÷Cpr
(3) 按细菌或细胞数量计算：
单位定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmol NADPH为一个酶活力单位。
NADP-ME（U/104 cell）= （U/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷(V样÷V样总×500) ÷T=△A×0.536
V反总：反应体系总体积，0.2×10-3 L；
ε：NADPH，6.22×103 L/mol/cm；
d：比色皿光径，0.6cm；
V样：加入样本体积，0.04mL；
V样总：加入提取液体积，1mL；
T：反应时间，5min；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
109：单位换算系数，1mol=109nmol；
W：样本质量，g；
500：细菌或细胞总数，500 万。

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注意事项

实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

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