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中文名称:过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒说明书
储存条件:按照标签要求储存
有效期:6个月
检测意义:POD广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是过氧化物酶体的标志酶,是其一类[氧化还原酶](https://baike.baidu.com/item/氧化还原酶/11052687),可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
在过氧化物酶(POD)的催化下,过氧化氢将愈创木酚氧化成茶褐色物质,该物质在 470nm 有最大光吸收,故可通过470nm下吸光度的变化测定过氧化物酶的活性。
1. 血清样本POD计算
单位定义:每毫升样本在每毫升反应体系中每分钟 A470 变化0.005为一个酶活力单位。
计算公式:POD(U/mL)=ΔA×V反总÷ V样 ÷0.01 ÷ T = 4000×ΔA
2. 组织、细胞样本POD计算
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义:每毫克组织蛋白在每毫升反应体系中每分钟 A470 变化0.005为一个酶活力单位。
计算公式:POD(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.01÷T =4000×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每克组织在每毫升反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 为一个酶活力单位。
计算公式:POD(U/g)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总) ÷ 0.005 ÷ T =4000 ×ΔA÷W
(3)按样本数量计算
单位定义:每104细胞在每毫升反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 为一个酶活力单位。
计算公式:POD(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500× V样÷V样总) ÷ 0.005 ÷ T =8×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,0.2mL;
V样:加入样本体积,0.01mL;
V样总:加入提取液体积,1 mL;
T:反应时间,1 min;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;
W:样本质量 g;
500:细胞数量,500万
1. 样本测试前请选取2个预期差异最大的样本,稀释成不同浓度进行预试,以选取最佳取样浓度;
2. 样本测定ΔA值如果小于 0.005,可将反应时间延长到 3-5 分钟,计算时除以相应的反应时间即可;如果高于 0.3 或者反应液中有较多气泡产生,可将样本用提取液进行稀释,计算时乘以相应的稀释倍数即可。