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中文名称:蔗糖酶活性检测试剂盒说明书
储存条件:按照标签要求储存
有效期:6个月
检测意义:蔗糖酶测定在临床与科研中具有重要意义。蔗糖酶活性检测可直观反映肠道黏膜上皮细胞的消化功能状态,对慢性腹泻、吸收不良综合征等肠道疾病的病因分析、病情评估及治疗方案调整提供关键依据;蔗糖酶活性测定则有助于监测全身性糖代谢紊乱,辅助诊断内分泌疾病或肠道疾病引发的代谢异常,通过动态观察酶活性变化,为疾病的早期发现、疗效评价及预后判断提供重要参考,助力临床精准诊疗。
蔗糖酶催化蔗糖分解生成葡萄糖和果糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,产物在540 nm处具有特征吸收峰,通过吸光值的变化即可表征酸性转化酶的活性。
1. 标准曲线绘制
以吸光度值为横坐标,标准品浓度为纵坐标,绘制标准曲线y =kx+ b,x为吸光度值,y为标准品浓度浓度(μg/mL)。根据标准曲线,将ΔA带入公式计算出样本浓度(y,μg/mL);
2. 血清(浆)蔗糖酶活力的计算
单位的定义:每mL血清(浆)每小时催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
计算公式:蔗糖酶活性(U/mL)= [1000×y×V样]÷V样÷T=200×y
3. 组织、细胞样本蔗糖酶计算
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
计算公式:蔗糖酶活性(U/mg prot)=[1000×y×V样]÷(V样×Cpr)÷T =200×y÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
计算公式:蔗糖酶活性(U/g 鲜重)=[1000×y×V样]÷(W×V样÷V样总)÷T=200×y÷W
(3)按细菌或细胞计算
单位定义:每1万个细菌或细胞每小时催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
计算公式:蔗糖酶活性(U/104 cell)=[1000×y×V样] ÷ ( 500 × V样 ÷ V样总 ) ÷ T =0.4×y
1000:1mg/mL=1000μg/mL;
V样:加入样本体积,0.025mL;
V样总:加入提取液体积,1mL;
T:反应时间,5min;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;
W:样本质量,g;
500:细胞数量,500万
1. 实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测;