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中文名称:β-葡萄糖苷酶(BG)试剂盒说明书
储存条件:按照标签要求储存
有效期:6个月
检测意义:组织及血液 β- 葡萄糖苷酶测定在临床与科研中具有重要价值。组织中的 β-葡萄糖苷酶活性检测,可辅助明确溶酶体贮积症、肿瘤发生发展等病理过程中细胞代谢紊乱的机制,为疾病发病机制研究及预后判断提供依据;血液 β-葡萄糖苷酶活性测定则有助于戈谢病等遗传性代谢疾病的早期筛查与诊断,同时可用于监测疾病治疗效果及病情演变,通过观察酶活性变化,指导临床制定精准治疗策略,评估患者康复进程与疾病转归情况。
底物在β-葡萄苷糖酶作用下水解,释放出游离的对硝基酚。加入碱性溶液停止反应,并使对硝基酚显色。在400nm处测吸光度,可计算酶活力单位。
1. 标准曲线绘制:
以吸光度值为横坐标,标准品浓度为纵坐标,绘制标准曲线y =kx+ b,x为吸光度值,y为标准品浓度浓度(μg/mL)。根据标准曲线,将ΔA带入公式计算出样本浓度(y,μg/mL);
2. β-葡萄糖苷酶活性:
(1) 血清(浆)BG活力的计算
单位的定义:每mL血清(浆)每小时催化产生1μg对硝基酚的量为一个酶活性单位。
计算公式:BG 活性(U/mL)= y ×V样÷V样÷T=2y
(2)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每毫克蛋白每小时催化产生1μg对硝基酚的量为一个活力单位。
计算公式:BG(U/mg prot)=y × V样 ÷ ( V样×Cpr ) ÷ T =2y ÷ Cpr
(3)按样本鲜重计算
单位定义:每克组织每小时催化产生1μg对硝基酚的量为一个活力单位。
计算公式:BG(U/g)=y × V样 ÷ ( W × V样 ÷ V样总 ) ÷ T =2y ÷ W
(4)按细菌或细胞计算
单位定义:每1万个细菌或细胞每小时催化产生1μg对硝基酚的量为一个活力单位。
计算公式:BG(U/104 cell)=y × V样 ÷ ( 500 × V样 ÷ V样总 ) ÷ T =0.004y
T:反应时间,0.5h;
V样:加入样本体积,0.01mL;
V样总:加入提取液体积,1 mL;
W:样本质量,g。
Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;
500:细胞数量,500万
1. 比色时,溶液呈现淡黄色,在2h内保持稳定。
2. 不同植物样本的β-葡萄糖苷酶差异较大,根据样本活性可以适当增加或者减少称取样本重量,也可增加反应时间。
3. 实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。