β-淀粉酶（β-AL）活性检测试剂盒（DNS 显色法）

产品信息

一、测定意义

淀粉酶负责水解淀粉，主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2) 从淀粉的非还原端切开α-1,4糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。

二、测定原理

还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸，β-淀粉酶不耐热。根据上述特性，钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。

三、包装清单

保存条件：试剂二、标准品4℃保存；试剂一常温保存。

四、注意事项

1、测定的吸光值大于1时，可以对样本进行适当稀释后测定。若吸光值过小，可以浓缩淀粉酶稀释液或者淀粉酶原液。

五、使用说明

1、 样品的准备：

a. 称取约0.1g样本，加入0.8mL蒸馏水，研磨匀浆；将匀浆倒入离心管中，提取液在室温下放置提取15min，每5min振荡1次，使其充分提取；6000g，常温离心10min，取上清液加蒸馏水定容至10mL，摇匀，即淀粉酶原液。

b. 吸取上述淀粉酶原液1mL，加入4mL双蒸水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于（α+β）淀粉酶总活力的测定。

2. 试剂盒的准备工作：

a. 试剂一：若有黄色晶体析出，需加热溶解后再用。

b. 试剂二：临用前加入35mL蒸馏水，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解。

c. 标准品：10mg无水葡萄糖。临用前加入1mL蒸馏水配制成10mg/mL的标准溶液。

3. 样品测定：

a. 分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

b. 将10mg/mL葡萄糖标准液用蒸馏水稀释为0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL的标准溶液。

c. 取2支EP管分别加入250μL淀粉酶原液和淀粉酶稀释液，沸水浴5min，分别作为α-淀粉酶对照管和β-淀粉酶对照管使用。

d. 按操作表依次加入各试剂：