BCA蛋白浓度测定试剂盒

产品信息

一、测定意义

BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。

灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。

在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。

二、测定原理

BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇(DTT)低于1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。

不适用BCA法时建议试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒(PKNA7-3-Q1000)。

每个试剂盒可以检测200个样品。

三、包装清单

保存条件：室温保存。蛋白标准配制成溶液后-20ºC冻存。

四、注意事项

1、需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。需96孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液的用量使不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

2、如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒(PKNA7-3-Q1000)

3、为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。

4、EDTA浓度必须小于10mM，不兼容EGTA。不适用BCA法时，Bradford蛋白浓度测定试剂盒(PKNA7-3-Q1000)

5、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

五、使用说明

1．蛋白标准品的准备

a.  取0.8ml蛋白标准配制液加入到一管蛋白标准(20mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白标准溶液。配制后可立即使用，也可以-20ºC长期保存。

b. 取适量25mg/ml蛋白标准，稀释至终浓度为0.5mg/ml。例如取20µl 25mg/ml蛋白标准，加入980µl稀释液即可配制成0.5mg/ml蛋白标准。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9% NaCl或PBS稀释标准品。稀释后的0.5mg/ml蛋白标准可以-20ºC长期保存。

2.BCA工作液的配制

根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5ml BCA试剂A加100µlBCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室温24小时内稳定。

3.蛋白浓度检测：

a.  将标准品按0、1、2、4、8、12、16、20µl加到96孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足到20µl，相当于标准品浓度分别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。

b. 加适当体积样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足20µl，需加标准品稀释液补足到20µl。请注意记录样品体积。

c. 各孔加入200µl BCA工作液，37ºC放置20-30分钟。

注: 也可以室温放置2小时，或60ºC放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反

应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。

d. 用酶标仪测定A562，或540-595nm之间的其他波长的吸光度。

e. 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品的蛋白浓度。

六、相关产品

1.  Bradford蛋白浓度测定试剂盒(1000T)

2.  Braford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂兼容型) （800T）

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七、公司介绍

陌凡生物科技有限公司是一家专业从事转基因检测、食品安全以及动植物疫病检测为核心业务的生物科技公司。能够为客户提供动植物疫病检测试剂、小分子抗原抗体、植物激素、植物抗体、重组蛋白等优质产品。自主研发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的各种试剂盒。产品覆盖面广，品质可靠。